蛋白Marker試劑蛋白跑不見了，這是怎么回事？

更新時間：2023-03-13

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　　蛋白Marker試劑是生物學(xué)常用的試劑之一，不僅可以用于直觀地監(jiān)測SDS-PAGE電泳的進(jìn)程，評估PVDF、尼龍和硝酸纖維素膜的轉(zhuǎn)移效率、還可以用于計量蛋白質(zhì)的大致分子量。

　　為何有時有些條帶會消失不見？或Marker蛋白高分子量跑著跑著不見了？

　　可以從以下幾方面查找原因：

　　1、很有可能是蛋白Marker遭到蛋白酶污染而造成降解：可能是跑膠緩沖液遭受蛋白酶（proteinase）污染，或是buffer重復(fù)使用太多次，導(dǎo)致長菌以致于有蛋白酶存在，或是上樣時反復(fù)使用同一支Tip。

　　解決辦法：

　　（1）上樣時避免反復(fù)使用同一支Tip。

　?。?）內(nèi)槽使用新鮮配置的跑膠緩沖液。

　?。?）如前面建議，如果實驗室太多人同時使用一管蛋白Marker試劑，因為每個人的使用習(xí)慣無法控制，建議可以先分成小管，就不會一次污染一整管造成浪費。

　　2、檢查所用凝膠的類型/百分比，凝膠濃度過低可能會導(dǎo)致小分子量條帶不能很好分散；反之，則可能會導(dǎo)致高分子量條帶不好分散。

　　凝膠電泳體系的影響排查：如需要排查是Marker的原因還是電泳體系的影響，建議可以在同一塊膠上進(jìn)行對比測試，在同一塊膠上電泳疑似問題產(chǎn)品和正常產(chǎn)品，看條帶是否有差異，以排除凝膠電泳系統(tǒng)的影響。

　　3、檢查蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)品的有效期，過期產(chǎn)品可能出現(xiàn)褪色或缺失條帶。

　　4、檢查蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)品的儲存條件，儲存條件不當(dāng)也會影響標(biāo)準(zhǔn)品中蛋白質(zhì)的穩(wěn)定性。

　　5、確保蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)品在裝入凝膠前未加熱/煮沸，該款蛋白Marker試劑為即用型，加熱/煮沸可能會導(dǎo)致標(biāo)準(zhǔn)品中的蛋白質(zhì)降解。

　　6、如遇膠上有、而轉(zhuǎn)膜后消失的話，請檢查轉(zhuǎn)膜后濾紙上是否有相應(yīng)Marker條帶并調(diào)整轉(zhuǎn)印條件。

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