ELISA相關(guān)問題（一）

更新時(shí)間：2025-08-05

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1. Q：競爭ELISA、雙抗夾心ELISA、間接ELISA都是什么？有什么區(qū)別？

	競爭ELISA	雙抗夾心ELISA	間接ELISA
特點(diǎn)	包被抗體，標(biāo)記抗原，樣本中的抗原與酶標(biāo)抗原競爭與固體抗體結(jié)合，標(biāo)本中抗原量含量越多，結(jié)合在固相上的酶標(biāo)抗原越少，最后的顯色也越淺。	使用兩個(gè)特異性單抗或者1個(gè)特異性單抗和1個(gè)特異性多抗，固相載體包被抗體，酶標(biāo)記特異性抗體作為檢測抗體。	固相載體包被抗原，酶標(biāo)記二抗，主要用于測抗體。
優(yōu)點(diǎn)	可適用比較不純的樣本，而且數(shù)據(jù)再現(xiàn)性很高。	使用兩個(gè)特異性抗體檢測，特異性好。	使用酶標(biāo)二抗增加了靈敏度，靈活度大，成本低。
缺點(diǎn)	整體的敏感性和專一性都較差。	成本高。	交叉反應(yīng)幾率升高。
用途	小分子抗原或者半抗原的定量檢測，當(dāng)抗原材料中干擾物質(zhì)不易去除或不易得到足夠的純化抗原時(shí)，多用于此方法檢測；一般小分子激素及藥物常用此法測定。	用于抗原的定量檢測。	通過檢測血清中的抗體來檢測病毒，如第1，2代艾滋病診斷試劑。常用于免疫動(dòng)物血清中抗體含量的測定。

2. Q：為什么推薦雙波長檢測（450nm和630nm）。

A：ELISA實(shí)驗(yàn)終止后形成的是黃色物質(zhì)，該物質(zhì)需要在450nm處測定其吸光度，630nm的吸光度只是檢測板子本身的吸光度，與酶標(biāo)板的材質(zhì)有關(guān)，測OD630可以消除各個(gè)板孔不干凈等非特異性因素引起的誤差。如果所使用的酶標(biāo)儀不可以檢測OD630也沒有關(guān)系，只讀取OD450的結(jié)果也可以。

數(shù)據(jù)處理時(shí)所用的矯正值，是把所有孔的OD值減去標(biāo)準(zhǔn)曲線0濃度孔的OD值，進(jìn)一步計(jì)算結(jié)果。

3. Q：CV值指的是什么？

A：CV值是統(tǒng)計(jì)學(xué)中的一個(gè)概念，中文是變異系數(shù)，可以認(rèn)為變異系數(shù)和極差、標(biāo)準(zhǔn)差和方差一樣，都是反映數(shù)據(jù)離散程度的絕對值。CV值越小，說明數(shù)據(jù)的波動(dòng)程度越小。在描述板內(nèi)、板間實(shí)驗(yàn)結(jié)果是否一致時(shí)常用到CV值，其越小，說明批內(nèi)及批間差越小，試劑盒質(zhì)量越好。

4. Q：標(biāo)曲擬合方式。

A：ELISA數(shù)據(jù)處理中所謂的“標(biāo)準(zhǔn)曲線"其實(shí)稱為擬合曲線比較合適。標(biāo)準(zhǔn)曲線的擬合方式有多種，直線、二次曲線、三次曲線、指數(shù)、對數(shù)等雖都可用于ELISA及其它生物學(xué)反應(yīng)中的曲線擬合，但都只適用于曲線的一部分，有的適用于前半段，有的適用于后半段，有的適用于中間一段，而四參數(shù)Logistic曲線擬合則對曲線的全部都有較好的適用性。目前國際上流行的免疫檢測擬合方式是“四參數(shù)Logistic擬合"，用這種擬合方式往往能夠比較精確的反映濃度和吸光度的曲線關(guān)系，從而進(jìn)一步比較正確地獲得樣品中待測物質(zhì)的濃度值。

建議用專門的軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，這樣可以快速、準(zhǔn)確地計(jì)算出結(jié)果。

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