考馬斯藍(lán)染色法（coomassie blue staining）又稱Bradford法，是 Bradford 于 1976 年建立起來的一種蛋白質(zhì)濃度的測定方法。蛋白質(zhì)濃度測定的方法有很多，考馬斯亮藍(lán)測定蛋白質(zhì)是實(shí)驗(yàn)室最常見的一種方式，它利用比色法和色素法混合方法、操作簡便。
考馬斯亮藍(lán)法測定蛋白質(zhì)濃度的原理
考馬斯亮藍(lán)(Coomassie Brilliant Blue)法測定蛋白質(zhì)濃度，是利用蛋白質(zhì)―染料結(jié)合的原理，定量的測定微量蛋白濃度的快速、靈敏的方法。這種蛋白質(zhì)測定法具有超過其他幾種方法的突出優(yōu)點(diǎn)，因而正在得到廣泛的應(yīng)用。這一方法是目前靈敏度最高的蛋白質(zhì)測定法。
考馬斯亮蘭G-250染料，在酸性溶液中與蛋白質(zhì)結(jié)合，使染料的最大吸收峰(lmax)的位置，由465nm變?yōu)?595nm，溶液的顏色也由棕黑色變?yōu)樘m色。通過測定595nm處光吸收的增加量可知與其結(jié)合蛋白質(zhì)的量。研究發(fā)現(xiàn)，染料主要是與蛋白質(zhì)中的堿性氨基酸(特別是精氨酸)和芳香族氨基酸殘基相結(jié)合。
考馬斯亮藍(lán)染色法法注意事項(xiàng)
1.在試劑加入后的5-20min內(nèi)測定光吸收，因?yàn)樵谶@段時(shí)間內(nèi)顏色是更穩(wěn)定的。
2.測定中，蛋白-染料復(fù)合物會有少部分吸附于比色杯壁上，測定完后可用乙醇將藍(lán)色的比色杯洗干凈。
3.利用考馬斯亮藍(lán)法分析蛋白必須要掌握好分光光度計(jì)的正確使用，重復(fù)測定吸光度時(shí)，比色杯一定要沖洗干凈，制作蛋白標(biāo)準(zhǔn)曲線的時(shí)候，蛋白標(biāo)準(zhǔn)品最好是從低濃度到高濃度測定，防止誤差。

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