脫脂奶粉可用于制備微生物培養(yǎng)基；配制ELISA、western等實(shí)驗(yàn)的封閉液。western blot經(jīng)過(guò)轉(zhuǎn)印以后，膜上有了蛋白，但是還有很多地方是沒(méi)有蛋白覆蓋的，通過(guò)脫脂奶粉的蛋白孵育后，這些空白的膜都被脫脂奶粉的蛋白覆蓋了，就防止后續(xù)孵育的一抗和二抗與印跡膜的非特異結(jié)合。在科研實(shí)驗(yàn)中，脫脂奶粉也是常用的生化試劑之一。

關(guān)于脫脂奶粉和BSA作為封閉劑的一些問(wèn)題

問(wèn)：western blot中脫脂奶粉封閉的是哪些蛋白?原理是什么?

答：脫脂奶粉中主要是乳清蛋白和酪蛋白。原理就是用非抗原?的蛋白去封閉膜，避免標(biāo)記抗體固定在膜上引起背景增高。

問(wèn)：請(qǐng)問(wèn)封閉液和抗體稀釋液用BSA?和脫脂奶粉有什么區(qū)別呢?

答：所謂封閉是用以減少或消除載體上的非特異性結(jié)合蛋白的分子，一般是脫脂奶粉或BSA。對(duì)WesterBlot來(lái)說(shuō)兩者均為常用封閉劑。脫脂奶粉的成份遠(yuǎn)較BSA復(fù)雜，如果要做ELISA或者phage display時(shí)候，我們還是用BSA。我推測(cè)也沒(méi)有依據(jù)說(shuō)脫脂奶粉就絕對(duì)不能用，注意的是各種品牌的脫脂奶粉中殘留的脂質(zhì)量不同， 脂質(zhì)是會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的，即使是用于WesterBlot也要有所挑選。

問(wèn)：封閉的時(shí)候，為什么一定要用脫脂奶粉?

答：膜上有蛋白缺損點(diǎn)，不用蛋白封蛋白缺損點(diǎn)容易出現(xiàn)非特異染色。也可用BSA封，效果并不比脫脂奶粉好。

問(wèn)：western封閉為什么用脫脂牛奶，不用全脂的？

答：是因?yàn)槿绻兄镜脑?，乳脂?huì)與奶粉中的蛋白結(jié)合，導(dǎo)致封閉的時(shí)候蛋白濃度下降，影響封閉的效果，有可能造成封閉不充分，所以都會(huì)用脫脂的奶粉來(lái)做。

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