Western blotting試劑（人IgG） ECL化學發(fā)光法檢測試劑盒
 

貨號 ：
SW2010 Western blotting (小鼠 IgG) ECL 化學發(fā)光法顯色試劑盒
SW2020 Western blotting (兔 IgG) ECL 化學發(fā)光法顯色試劑盒
SW2030 Western blotting (山羊 IgG) ECL 化學發(fā)光法顯色試劑盒
SW2040 Western blotting(小鼠/兔 IgG) ECL 化學發(fā)光法顯色試劑盒
SW2050 Western blotting(人 IgG) ECL 化學發(fā)光法顯色試劑盒

產品內容：

1. 封閉試劑：30g(可配制 400ml)。
2. 10 倍濃縮抗體稀釋液，50ml。
3. HRP 標記二抗，0.3ml，效價 1：500-1000。
4. ECL 顯色液，25mlA+25mlB。

保存 ：
    -20℃避光密閉保存，一年有效。若經(jīng)常使用，可將封閉試劑，抗體稀釋液和 ECL 顯色液存放于 2-8℃以方便使用。

產品簡介 ：
    SDS-PAGE電泳后，蛋白質按照分子量大小分離，轉移到固相載體（例如硝酸纖維素薄膜）后，固相載體以非共價鍵形式吸附蛋白質，以固相載體上的蛋白質或多肽作為抗原，與對應的抗體起免疫反應，再與酶標記的第二抗體起反應，加入發(fā)光底物后，能讓膠片感光。經(jīng)顯影和定影后，可以在膠片上顯示出條帶（抗原所在位置） 。

    經(jīng)過PAGE分離的蛋白質樣品，轉移到固相載體(例如硝酸纖維素薄膜)上，固相載體以非共價鍵形式吸附蛋白質，且能保持電泳分離的多肽類型及其生物學活性不變。以固相載體上的蛋白質或多肽作為抗原，與對應的抗體起免疫反應，再與酶或同位素標記的第二抗體起反應，經(jīng)過底物顯色或放射自顯影以檢測電泳分離的特異性目的基因表達的蛋白成分。該技術也廣泛應用于檢測蛋白水平的表達。Western blotting 檢測系統(tǒng)除需要過氧化物酶標記的各種二抗外，還需要配套的顯色試劑。索萊寶提供DAB顯色和ECL化學發(fā)光兩種試劑及相應試劑盒。

操作步驟 ：(僅供參考)
常規(guī)電泳轉膜后:
    1) 清洗轉印膜：將膜剝離下后，作好標記，一般在左上角剪一缺口。室溫用 TBS-T 漂洗 3 次每次 5min,以盡量洗去轉印膜上的 SDS，防止影響后面的抗體結合。
    2) 按 5g 封閉試劑加 100ml 雙蒸水計，配制膜封閉液，配好的膜封閉液為乳白色懸液，將漂洗過的轉印膜放入封閉液內，置搖床孵育，室溫封閉 30min。用 TBS-T 緩沖液（PH7.6）洗膜，室溫漂洗 3 次每次 5min。
    3) 將 10×抗體稀釋液用雙蒸水稀釋成 1× （10ml 10×抗體稀釋液加入 90ml 雙蒸水， 混勻， 可 4℃保存三個月） 。
    此稀釋液可作為一抗和二抗的稀釋液。
    4) 用 1×的抗體稀釋液稀釋一抗。根據(jù)用量以及一抗的推薦稀釋濃度來稀釋一抗。將雜交膜放入雜交袋中，加入一抗工作液，封口，4℃孵育或 37℃搖動孵育 2h。此用過的抗體一般可回收第二天再使用一次。注：如果所加一抗不同，可在此步將膜沿電泳方向剪成條，分別作好標記，分開孵育。
    5) 用 TBS-T 緩沖液（PH7.6）洗膜，室溫漂洗 3 次每次 5min。
    6) 用 1×的抗體稀釋液稀釋二抗。根據(jù)用量，按 10ml 抗體稀釋液加入 15ul HRP 標記二抗的比例，配制二抗工作液。將雜交膜放入雜交袋中，加入二抗工作液，封口， 37℃搖動孵育 1h。此用過的抗體一般可回收第二天再使用一次。
    7) 用 TBS-T 緩沖液（PH7.6）洗膜，室溫漂洗 3 次每次 10min。
    8) 根據(jù)用量，取 ECL 發(fā)光液 A、B 等量混勻，加在膜正面，暗室顯色 1-5 分種。傾去顯色液，小心用紙吸去顯色液，在上面蓋一層平整的透明紙。再取出感光膠片，做好標記，輕輕的放在膜上，顯色 30 秒到 1 分鐘，取出膠片浸入顯影液中，觀察顯色情況，再放入定影液中 1 分鐘。根據(jù)條帶強弱，再次感光時可減短或者加長感光時間（從 5 秒到 30 分鐘）以期達到理想結果。

注意事項 ：
    1. 請根據(jù)一抗來源選擇試劑盒。
    2. 可以根據(jù)顯色結果來優(yōu)化實驗反應時間。如背景過深，可延長膜封閉時間，加長終漂洗次數(shù)與時間。如果條帶過弱，可增加抗體濃度，可延長抗體孵育時間或加長感光時間。
    3. TBS-T（0.01M，PH7.6）配制方法：稱取 NaCl 8.5g ，Tris 1.21g ，用 800ml 的雙蒸水溶解，用鹽酸調 PH 到7.6，再加入 0.5ml Tween－20，用雙蒸水 加 1000ml，混勻即可。 （也可按照自己的配制習慣來配制）
 

相關產品 ：

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運輸說明：

1、極低溫產品：極低溫產品運輸過程中加裝干冰運輸。用干冰把產品包裹起來，再用泡沫盒密封，膠帶層層粘住泡沫盒，放入索萊寶的箱子，然后交付給合作快遞，安全快速高效放心的送客戶的手中，保證產品的性質穩(wěn)定如一，為您的實驗保駕護航。
2、低溫產品：低溫產品運輸過程中加裝索萊寶冰袋運輸。事先用冰袋把產品包裹起來，再使用泡沫盒密封，用膠帶嚴實密封泡沫盒，再放入索萊寶的箱子（保溫效果少可以持續(xù)一周），然后交付給合作快遞，安全快速高效放心的送客戶的手中，保證產品的性質穩(wěn)定如一，為您的實驗保駕護航。
3、常溫產品：常溫產品運輸過程中無需加冰或者特殊包裝。產品由公司庫房人員快速配貨，準確快速高效的快遞保證產品快速送達您的手中。