儲存條件
-20℃
中文名稱
乙酸激酶(ACK)活性檢測試劑盒其它
有效期
6個月
單位
盒
英文名稱
Acetokinase(ACK) Activity Assay Kit
檢測方法
紫外分光光度法 Spectrophotometer
規(guī)格
50T/48S

產品型號：BC3170-50T/48S

更新時間：2025-08-26

廠商性質：生產廠家

訪問量：1546

服務熱線

010-50973130

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產品分類

PRODUCT CLASSIFICATION

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產品介紹

乙酸激酶（ACK）活性檢測試劑盒說明書
紫外分光光度法
注意：本產品試劑有所變動，請注意并嚴格按照該說明書操作。
貨號：BC3170
規(guī)格：50T/48S
產品組成：使用前請認真核對試劑體積與瓶內體積是否一致，有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。

試劑名稱	規(guī)格	保存條件
提取液	液體50 mL×1瓶	2-8℃保存
試劑一	液體30 mL×1瓶	2-8℃保存
試劑二	粉劑×1瓶	2-8℃保存
試劑三	粉劑×2瓶	-20℃保存
試劑四	粉劑×2瓶	-20℃保存
試劑五	粉劑×1支	-20℃保存
試劑六	液體95 μL×1瓶	2-8℃保存
試劑七	液體110 μL×1瓶	-20℃保存
試劑八	粉劑×1瓶	2-8℃保存
試劑九	粉劑×1支	2-8℃保存

溶液的配制：

提取液：臨用前將試劑九加入到提取液中，并于2-8℃保存；
試劑二：臨用前每瓶加入4 mL蒸餾水，充分溶解待用。用不完的試劑仍2-8℃保存；
試劑三：臨用前每瓶加入3 mL蒸餾水，充分溶解待用；用不完的試劑-20℃保存；
試劑四：臨用前每瓶加入2 mL蒸餾水，充分溶解待用；用不完的試劑-20℃保存；
試劑五：臨用前每支加入1 mL蒸餾水，充分溶解待用；用不完的試劑-20℃保存；
試劑六：液體置于試劑瓶內EP管中。臨用前根據(jù)樣本量將試劑六、蒸餾水按43:457（V:V）的比例配制備用，現(xiàn)用現(xiàn)配；
試劑七：液體置于試劑瓶內EP管中。臨用前根據(jù)樣本量將試劑七、蒸餾水按1:9（V:V）的比例配制備用，現(xiàn)用現(xiàn)配；
試劑八：臨用前加入5 mL蒸餾水，充分溶解待用。用不完的試劑仍2-8℃保存；
工作液：吸取0.3 mL 試劑二、1 mL試劑三、0.65 mL試劑四、0.2 mL試劑五、0.2 mL試劑六、0.2 mL試劑七、1 mL試劑八混勻，也可根據(jù)比例現(xiàn)用現(xiàn)配，于冰上備用。

產品說明：
ACK廣泛存在于生物體內，催化乙酸和ATP生成乙酰磷酸和ADP，是細菌碳代謝和能量代謝的關鍵酶，尤其是在古細菌甲烷合成代謝中起著中樞作用。
測定原理如下：（1）ACK催化乙酸鈉和ATP生成乙酰磷酸和ADP，（2）*酸激酶催化ADP和PEP生成ATP和*酮酸，（3）乳酸脫氫酶催化丙*酸和NADH生成乳酸和NAD⁺，（4）在340nm下測定NADH氧化生成NAD⁺

速率，即可反映ACK活性。
注意：實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。
需自備的儀器和用品：
臺式離心機、紫外分光光度計、水浴鍋、1mL石英比色皿、可調式移液槍、研缽/勻漿器、冰、蒸餾水。
操作步驟：具體操作步驟詳見“產品資料"附件
注意事項：

測定過程中樣本和所有試劑在冰上放置，以免變性和失活。
比色皿中反應液的溫度必須保持37℃或25℃，取小燒杯一只裝入一定量的37℃或25℃蒸餾水，將此燒杯放入37℃或25℃水浴鍋中。在反應過程中把比色皿連同反應液放在此燒杯中。
ΔA大于1時，建議稀釋后測量，注意計算公式乘以稀釋倍數(shù)；ΔA小于0.01時，建議延長反應時間測量，注意計算公式變化。

實驗實例：

取0.1g腎臟組織樣本，加入1mL提取液進行勻漿研磨，取上清后按照測定步驟操作，測得計算ΔA測定=A測定1-A測定2=1.893-1.147=0.746，ΔA空白=A空白1-A空白2=1.453-1.448=0.005，ΔA=ΔA測定-ΔA空白= 0.746-0.005=0.741，按樣本質量計算酶活得：

ACK（U/g 質量）=536×ΔA÷W=536×0.741÷0.1=3971.76 U/g 質量。

取500萬大腸桿菌加入1mL提取液超聲破碎，離心，取上清后按照測定步驟操作，測得計算ΔA測定=A測定1-A測定2=1.476-1.448=0.028，ΔA空白=A空白1-A空白2=1.453-1.448=0.005，ΔA=ΔA測定-ΔA空白=0.028-0.005=0.023，按細菌數(shù)量計算酶活得：

ACK（U/10⁴cell）=1.072×ΔA=1.072×0.023=0.0247 U/10⁴ cell。
參考文獻：

Mukhopadhyay S, Hasson M S, Sanders D A. A continuous assay of acetate kinase activity: Measurement of inorganic phosphate release generated by hydroxylaminolysis of acetyl phosphate[J]. Bioorganic chemistry, 2008, 36(2): 65-69.