氧化型谷*甘肽含量檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)
微量法
注意：本產(chǎn)品試劑有所變動(dòng)，請(qǐng)注意并嚴(yán)格按照該說(shuō)明書(shū)操作。
貨號(hào)：BC1185
規(guī)格：100T/96S
產(chǎn)品組成：使用前請(qǐng)認(rèn)真核對(duì)試劑體積與瓶?jī)?nèi)體積是否一致，有疑問(wèn)請(qǐng)及時(shí)聯(lián)系索萊寶工作人員。

溶液的配制：

1. 試劑二：有毒易揮發(fā)試劑，涉及該試劑的步驟建議在通風(fēng)櫥內(nèi)操作。

2. 試劑五：臨用前加入2.5 mL蒸餾水，溶解后-20℃分裝可保存4周，避免反復(fù)凍融。

3. 試劑六工作液：先將試劑六內(nèi)液體離心至底部再用移液槍吹打混勻使用。臨用前根據(jù)樣本數(shù)量按照試劑六：蒸餾水=1μL：20μL（21μL，約10T）的比例配制備用，現(xiàn)用現(xiàn)配。

4. 標(biāo)準(zhǔn)品：10mg氧化型谷*甘肽。臨用前加入1 mL蒸餾水，充分溶解，濃度為10 mg/mL，2-8℃可保存4周。

產(chǎn)品說(shuō)明：
氧化型谷*甘肽（*）是谷*甘肽（GSH）的氧化形式，又稱(chēng)為二硫代谷*甘肽，是兩分子的谷*甘肽氧化而成。*會(huì)被谷*甘肽還原酶還原成GSH，因此機(jī)體中大多數(shù)是以還原型形式存在。測(cè)定細(xì)胞內(nèi)GSH和*含量以及GSH/*比值，能夠很好地反映細(xì)胞所處的氧化還原狀態(tài)。本試劑盒利用谷*甘肽能和5,5’-二硫代-雙-（2-硝*甲酸）（5,5’-dithiobis-2-nitrobenoic acid，DTNB）反應(yīng)產(chǎn)生2-硝基-5-*甲酸，2-硝基-5-*甲酸在波長(zhǎng)412nm處具有最大光吸收的特點(diǎn)，通過(guò)2-乙烯吡啶抑制樣本中原有的還原型谷*甘肽，然后利用谷*甘肽還原酶將*還原為GSH，借此測(cè)定氧化型谷*甘肽的含量。

技術(shù)指標(biāo)：
低檢出限：3.211 μg/mL
線(xiàn)性范圍：3.9-125 μg/mL
注意：實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測(cè)量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測(cè)。

需自備的儀器和用品：
可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、分析天平、低溫離心機(jī)、水浴鍋/恒溫培養(yǎng)箱、移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、勻漿器/研缽/細(xì)胞超聲破碎儀、冰和蒸餾水。
操作步驟：具體操作步驟詳見(jiàn)“產(chǎn)品資料"附件

注意事項(xiàng)：

1. 若不確定樣本中*含量的高低，可稀釋幾個(gè)梯度后再進(jìn)行測(cè)量。

2. 如果測(cè)定吸光值超過(guò)線(xiàn)性范圍吸光值，可以增加樣本量或者稀釋樣本后再進(jìn)行測(cè)定。

3. 因?yàn)樵噭┮恢泻械鞍踪|(zhì)沉淀劑，因此上清液不能用于蛋白濃度測(cè)定。如需測(cè)定蛋白含量，需另取組織。

實(shí)驗(yàn)實(shí)例：

1. 取0.1064g大鼠肝臟加入1mL試劑一進(jìn)行冰浴勻漿，按照測(cè)定步驟操作，用96孔板測(cè)得計(jì)算ΔA測(cè)定= A2測(cè)定-A1測(cè)定=0.240-0.149=0.091，ΔA空白=A2空白-A1空白=0.118-0.114=0.004，ΔA測(cè)定-ΔA空白=0.087，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲y=0.0117x - 0.0122， R²=0.9989，x=8.479，按樣本質(zhì)量計(jì)算得：

*含量（μg/g 質(zhì)量）=x÷W =79.690 μg/g 質(zhì)量。

1. 取0.1050g韭菜葉片加入1mL試劑一進(jìn)行冰浴勻漿，按照測(cè)定步驟操作，用96孔板測(cè)得計(jì)算ΔA測(cè)定= A2測(cè)定-A1測(cè)定=0.198-0.150=0.048，ΔA空白=A2空白-A1空白=0.118-0.114=0.004，ΔA測(cè)定-ΔA空白=0.044，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)y=0.0117x - 0.0122，R²=0.9989，x=4.803，按樣本質(zhì)量計(jì)算得：

*含量（μg/g 質(zhì)量）=x÷W =45.74 μg/g 質(zhì)量。
相關(guān)發(fā)表文獻(xiàn)：
[1] Ming Song,Fangfang Chen,Yihui Li,et al. rimetazidine restores the positive adaptation to exercise training by mitigating statin-induced skeletal muscle injury. Journal of Cachexia, Sarcopenia and Muscle. November 2017;(IF10.754)
[2] Hua Li,Lanying Wang,Yanping Luo. Composition Analysis by UPLC-PDA-ESI (?)-HRMS and Antioxidant Activity Using Saccharomyces cerevisiae Model of Herbal Teas and Green Teas from Hainan. Molecules. October 2018;(IF3.06)
參考文獻(xiàn)：

1. Alpert A J, Gilbert H F. Detection of oxidized and reduced glutathione with a recycling postcolumn reaction[J]. Analytical biochemistry, 1985, 144(2): 553-562.

2. Owens C W I, Belcher R V. A colorimetric micro-method for the determination of glutathione[J]. Biochemical Journal, 1965, 94(3): 705.

相關(guān)系列產(chǎn)品：
BC1170/ BC1175 還原型谷*甘肽（GSH）含量檢測(cè)試劑盒
BC1190/ BC1195 谷*甘肽過(guò)氧化物酶（GSH-Px/GPX）活性檢測(cè)試劑盒
BC0350/ BC0355 谷*甘肽S-轉(zhuǎn)移酶（GST）活性檢測(cè)試劑盒
BC1160/ BC1165 谷*甘肽還原酶（GR）活性檢測(cè)試劑盒

氧化型谷*甘肽(GSSG)含量檢測(cè)試劑盒 微量 氧化型谷*甘肽(GSSG)含量檢測(cè)試劑盒 微量