胞漿異檸檬酸脫氫酶（ICDHc）活性檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書
微量法
貨號(hào)：BC0405
規(guī)格：100T/96S
產(chǎn)品組成：使用前請(qǐng)認(rèn)真核對(duì)試劑體積與瓶?jī)?nèi)體積是否一致，有疑問(wèn)請(qǐng)及時(shí)聯(lián)系索萊寶工作人員。

溶液的配制：

1. 試劑一：用時(shí)加入20 mL提取液溶解；

2. 試劑二：用時(shí)每支加275 μL雙蒸水充分溶解備用；

3. 試劑三：用時(shí)每支加275 μL雙蒸水充分溶解備用；

4. 工作液配制：將試劑一、試劑二、試劑三按85：1：1的比例混合，現(xiàn)用現(xiàn)配。

產(chǎn)品說(shuō)明：
ICDHc（EC 1.1.1.42）廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中，催化異檸檬酸脫氫脫羧生成 α-酮戊二酸，同時(shí)還原NADP⁺生成NADPH。ICDHc是細(xì)胞質(zhì)中除了磷酸戊糖途徑外又一種NADPH重要來(lái)源，在逆境中該酶活性通常會(huì)發(fā)生顯著變化。
利用ICDHc催化NADP⁺還原成NADPH反應(yīng)，在340nm下測(cè)定NADPH濃度的增加，即可反映ICDHc活性。
注意：實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測(cè)量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測(cè)。
需自備的儀器和用品：
紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、恒溫水浴鍋、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板（UV板）、研缽/勻漿器、冰和蒸餾水。
操作步驟：具體操作步驟詳見(jiàn)“產(chǎn)品資料"附件
注意事項(xiàng)：

1. 若A2-A1大于0.5，需將酶液用提取液稀釋，使A2-A1小于0.5，可提高檢測(cè)靈敏度。若初始值A1大于0.5可嘗試將酶液用提取液稀釋。

2. 實(shí)驗(yàn)時(shí)，試劑二、試劑三和樣本在冰上放置，以免變性和失活；工作液37℃水浴放置。

3. 比色皿中反應(yīng)液的溫度必須保持37℃，取小燒杯一只裝入一定量的37℃蒸餾水，將此燒杯放入37℃水浴鍋中。在反應(yīng)過(guò)程中把比色皿連同反應(yīng)液放在此燒杯中。

4. 最好兩個(gè)人同時(shí)做此實(shí)驗(yàn)，一個(gè)人比色，一個(gè)人計(jì)時(shí)，以保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。

實(shí)驗(yàn)實(shí)例：

1. 取0.1g稗草，加入1mL提取液，進(jìn)行冰浴勻漿，然后8000g 4℃離心10min，取上清，之后按照測(cè)定步驟操作，用微量石英比色皿測(cè)得計(jì)算ΔA=A2-A1=0.2285-0.2139=0.0146，按樣本質(zhì)量計(jì)算酶活得：

ICDHc活性（U/g 質(zhì)量）=1608×ΔA÷W=234.768 U/g 質(zhì)量。

1. 取0.1g小鼠腎組織，加入1mL提取液，進(jìn)行冰浴勻漿，然后8000g 4℃離心10min，取上清稀釋10倍，之后按照測(cè)定步驟操作，用微量石英比色皿測(cè)得計(jì)算ΔA=A2-A1=0.5989-0.1263=0.4726，按樣本質(zhì)量計(jì)算酶活得：

ICDHc活性（U/g 質(zhì)量）=1608×ΔA÷W×10=75994.08 U/g 質(zhì)量。
參考文獻(xiàn)：

1. Miake F, TORIKATA T, KOGA K, et al. Isolation and characterization of NADP+-specific isocitrate dehydrogenase from the pupa of Bombyx mori[J]. The Journal of Biochemistry, 1977, 82(2): 449-454.

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