葡萄糖含量檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)
微量法
注意：本產(chǎn)品試劑有所變動(dòng)，請(qǐng)注意并嚴(yán)格按照該說(shuō)明書(shū)操作。
貨號(hào)：BC2505
規(guī)格：100T/96S
產(chǎn)品組成：使用前請(qǐng)認(rèn)真核對(duì)試劑體積與瓶?jī)?nèi)體積是否一致，有疑問(wèn)請(qǐng)及時(shí)聯(lián)系索萊寶工作人員。

溶液的配制：

1. 試劑一：2μmol/mL葡萄糖溶液；

2. 混合試劑的配制：使用前將試劑二和試劑三1：1等體積混合，用多少配多少。

產(chǎn)品說(shuō)明：
葡萄糖不僅是細(xì)胞能量代謝的主要底物，而且其代謝中間產(chǎn)物是生物合成的重要底物。植物可通過(guò)光合作用產(chǎn)生葡萄糖。就哺乳動(dòng)物而言，葡萄糖不僅是大腦神經(jīng)系統(tǒng)、肌肉、脂肪組織等的能源，而且與還原性輔酶、乳糖和乳脂的合成密切相關(guān)。
葡萄糖氧化酶（Glucose Oxidase，GOD）催化葡萄糖氧化成葡萄糖酸，并產(chǎn)生過(guò)氧化氫；過(guò)氧化物酶（Peroxidase，POD）催化過(guò)氧化氫氧化4-氨基安比林偶聯(lián)酚，生成有色化合物，在505 nm 有特征吸收峰。
技術(shù)指標(biāo)：
低檢出限：0.02 μmol/mL
線性范圍：0.03-5 μmol/mL
注意：實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測(cè)量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測(cè)。
需自備的儀器和用品：
可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、水浴鍋/恒溫培養(yǎng)箱、臺(tái)式離心機(jī)、超聲破碎儀、可調(diào)式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研缽/勻漿器、蒸餾水。
操作步驟：具體操作步驟詳見(jiàn)“產(chǎn)品資料"附件
注意事項(xiàng)：
若（A測(cè)定-A空白）小于0.005，建議加大提取樣本質(zhì)量（或細(xì)胞數(shù)量）或者樣本上清液的加入量；（A測(cè)定-A空白）大于1.2，將上清液用蒸餾水稀釋即可。計(jì)算公式中注意乘以稀釋倍數(shù)。
實(shí)驗(yàn)實(shí)例：

1. 
   

1. 
   

2. 取0.1g小鼠肝臟加入1mL蒸餾水進(jìn)行前處理步驟，離心取上清后按測(cè)定步驟測(cè)定，用96孔板測(cè)得吸光值ΔA測(cè)定=A測(cè)定-A空白=0.856-0.051=0.805，ΔA標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)-A空白=0.724-0.051=0.673。按樣本質(zhì)量計(jì)算葡萄糖含量（μmol/g 質(zhì)量）= 2×ΔA測(cè)定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷W=2×0.805÷0.673÷0.1= 23.923 μmol/g 質(zhì)量

3. 
   

2. 
   

1. 
   

2. 取0.1g綠蘿葉片加入1mL蒸餾水進(jìn)行前處理步驟，離心取上清后按測(cè)定步驟測(cè)定，用96孔板測(cè)得吸光值ΔA測(cè)定=A測(cè)定-A空白=0.318-0.051=0.267，ΔA標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)-A空白=0.724-0.051=0.673。按樣本質(zhì)量計(jì)算葡萄糖含量（μmol/g 質(zhì)量）= 2×ΔA測(cè)定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷W=2×0.267÷0.673÷0.1=7.935 μmol/g 質(zhì)量

3. 
   

3. 
   

1. 
   

2. 取5百萬(wàn)Jurkat細(xì)胞樣本加入1mL蒸餾水進(jìn)行前處理步驟，離心取上清后按測(cè)定步驟測(cè)定，用96孔板測(cè)得吸光值ΔA測(cè)定=A測(cè)定-A空白=0.057-0.051=0.007，ΔA標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)-A空白=0.724-0.051=0.673。按細(xì)胞數(shù)量計(jì)算葡萄糖含量（μmol/10⁶ cell)  =0.4×ΔA測(cè)定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)=0.4×0.007÷0.673=4.16×10^-3 μmol/10⁶ cell

3. 
   

相關(guān)發(fā)表文獻(xiàn)：
[1] Meixi Peng, Dan Yang, Yixuan Hou, et al. Intracellular citrate accumulation by oxidized ATM-mediated metabolism reprogramming via PFKP and CS enhances hypoxic breast cancer cell invasion. Cell Death and Disease. March 2019; (IF5.959)
[2] Jing Li,Yabing Duan,Chuanhong Bian,et al. Effects of validamycin in controlling Fusarium head blight caused by Fusarium graminearum: Inhibition of DON biosynthesis and induction of host resistance. Pesticide Biochemistry and Physiology. January 2019; 153:152-160. (IF2.87)
參考文獻(xiàn)：
[1] Basagni U, Bonicolini F. Ready to use liquid reagent for determining the glucose content in blood: U.S. Patent 5,077,199[P]. 1991-12-31.
[2] Kabasakalian P, Kalliney S, Westcott A. Enzymatic blood glucose determination by colorimetry of N, N-diethylaniline-4-aminoantipyrine[J]. Clinical chemistry, 1974, 20(5): 606-607.
相關(guān)系列產(chǎn)品：
BC0340/BC0345 糖原含量檢測(cè)試劑盒
BC2540/BC2545 纖維素酶（CL）活性檢測(cè)試劑盒
BC0330/BC0335 海藻糖含量檢測(cè)試劑盒
BC2490/BC2495 血糖含量檢測(cè)試劑盒

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