儲存條件
-20℃
中文名稱
吡咯啉-５-羧酸合成酶活性檢測試劑盒其它
有效期
6個月
單位
盒
英文名稱
Δ1-pyrroline-5-carboxylate(P5CS) synthetase Activity Assay Kit
檢測方法
紫外分光光度法 Spectrophotometer
規(guī)格
50T/48S

產(chǎn)品型號：BC4420-50T/48S

更新時間：2024-04-16

廠商性質(zhì)：生產(chǎn)廠家

訪問量：1064

服務熱線

010-50973130

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產(chǎn)品分類

PRODUCT CLASSIFICATION

生化檢測試劑盒-常量法

谷胱甘肽過氧化物酶4（GPX4）活性檢測總谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px/GPX）活性檢測 α-L-巖藻糖苷酶（AFU）活性檢測硫代葡萄糖苷含量檢測生物堿含量檢測總氧化狀態(tài)（TOS）檢測 α-基丁酸脫氫酶（α－HBDH）活性檢測 3-磷酸甘油酯酶（GPP）活性檢測水溶性物質(zhì)羥自由基清除能力檢測植物銨態(tài)氮含量檢測試劑盒血清（漿）二胺氧化酶（DAO）活性檢測試劑盒細胞酸性磷酸酶細胞堿性磷酸酶果膠系列轉(zhuǎn)氫酶系列光合作用系列維生素系列糖原系列糖異生系列蛋白含量測定系列其它系列信號系列土壤系列離子系列 P450系列糖代謝系列蔗糖系列淀粉系列脂肪酸代謝系列蛋白酶系列糖酵解系列三羧酸循環(huán)系列線粒體呼吸鏈系列酯酶系列氨基酸代謝系列氮代謝系列 ATP系列抗逆系列抗氧系列氧化系列維生素C代謝系列谷胱甘肽系列輔酶Ⅱ系列輔酶Ⅰ系列

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產(chǎn)品介紹

1-吡咯啉-5-羧酸合成酶（P5CS）活性檢測試劑盒說明書

紫外分光光度法

貨號: BC4420

規(guī)格: 50T/48S

產(chǎn)品組成：使用前請認真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致，有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。

試劑名稱	規(guī)格	保存條件
提取液一	液體60 mL×1瓶	2-8℃保存
提取液二	液體0.6 mL×1支	-20℃保存
試劑一	液體40 mL×1瓶	2-8℃保存
試劑二	液體6 mL×1瓶	2-8℃保存
試劑三	粉劑×2瓶	-20℃保存
試劑四	粉劑×2瓶	-20℃保存

溶液的配制：

1、試劑三：臨用前加入2.5 mL蒸餾水溶解，現(xiàn)配現(xiàn)用，-20℃分裝保存，-20℃保存一周；

2、試劑四：臨用前每瓶加入3 mL蒸餾水溶解，現(xiàn)配現(xiàn)用，-20℃分裝保存，-20℃保存一周。

產(chǎn)品說明：

在干旱、鹽漬化、重金屬、紫外線等不同的脅迫條件下，均會誘導植物體內(nèi)脯*酸的積累，對植物起到保護作用。高等植物中，脯*酸的合成有兩條途徑，分別以谷*酸和鳥*酸為前體。谷*酸途徑主要負責脅迫條件下脯*酸的積累，而鳥*酸途徑主要在氮充足條件下起作用，與脅迫情況下脯*酸的積累沒有關(guān)系。

1-吡咯啉-5-羧酸合成酶（P5CS）是脯*酸的谷*酸合成途徑中的關(guān)鍵酶，P5CS是一個雙功能酶，在NADPH和ATP作用下，可催化谷*酸磷酸化及谷*酸 γ-半醛還原，通過測定NADPH在340 nm處吸光度的變化，可計算出P5CS的活性高低。

注意：實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。

需自備的儀器和用品：

紫外分光光度計、低溫離心機、水浴鍋/恒溫培養(yǎng)箱、1 mL石英比色皿、可調(diào)式移液槍、研缽/勻漿器、冰和蒸餾水、EP管。

操作步驟：

一、樣本處理（可適當調(diào)整待測樣本量，具體比例可以參考文獻）

組織樣本：按質(zhì)量（g）︰提取液體積（mL）1︰5~10比例（建議稱取0.1 g樣本，加入1.0 mL提取液一）加入提取液一，再加入10 μL提取液二，冰浴勻漿后于4℃，8000 rpm，離心15 min，棄沉淀，取上清液置于冰上待測。

二、測定步驟

1、分光光度計預熱30 min以上，調(diào)節(jié)波長至340 nm，蒸餾水調(diào)零。

2、將試劑三、試劑四置于冰上待測。

3、操作表：（在1 mL石英比色皿中操作）

試劑名稱（μL）	空白管	測定管
蒸餾水	100	-
樣本	-	100
試劑一	600	600
試劑二	100	100
試劑三	100	100
試劑四	100	100
在1mL石英比色皿中分別加入上述試劑，充分混勻后于340 nm處測定10s時的吸光值A1，迅速置于37℃水浴鍋/37℃培養(yǎng)箱放置5min，拿出迅速擦干測定5min 10s時的吸光值A2，計算ΔA測定管= A1測定-A2測定，ΔA空白管=A1空白-A2空白，ΔA=ΔA測定管-ΔA空白管。

注意：空白管只需測定1-2次。

三、P5CS酶活計算

1、按樣本蛋白濃度計算

酶活單位定義：每毫克組織蛋白每分鐘消耗1 nmol NADPH為一個酶活單位。

P5CS酶活（U/mg prot）=ΔA÷ε÷d×V反總×10⁹÷(V樣×Cpr)÷T =321.54×ΔA÷Cpr

2、按樣本質(zhì)量計算

酶活單位定義：每克組織每分鐘消耗1 nmol NADPH為一個酶活單位。

P5CS酶活（U/g 質(zhì)量）= ΔA÷ε÷d×V反總×10⁹÷(W×V樣÷V樣總)÷T =324.76×ΔA÷W

ε：NADPH摩爾消光系數(shù)，6.22×10³ L/mol/cm；d：比色皿光徑，1 cm；V反總：反應體系總體積，0.001L；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL；V樣：加入反應體系中上清液體積，0.1 mL；V樣總：加入提取液體積，1.01 mL；W：樣本質(zhì)量，g；T：反應時間，5 min；10⁹：單位換算系數(shù)，1mol=10⁹nmol。