土壤中性木聚糖酶（S-NEX）活性檢測試劑盒說明書

微量法

貨號：BC5735

規(guī)格：100T/48S

產品組成：使用前請認真核對試劑體積與瓶內體積是否一致，有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。

溶液的配制：

1、 標準品：10mg木糖。臨用前加入667μL蒸餾水配制成100μmol/mL的木糖標準液，2-8℃保存8周。

產品說明：

土壤中性木聚糖酶（Soil neutral xylanase, S-NEX），又稱為土壤中性半纖維素酶，主要分離自最適生長pH為6-8的微生物。

在中性環(huán)境中，S-NEX催化木聚糖降解成還原性寡糖和單糖，在沸水浴條件下進一步與3,5-二硝基水楊酸發(fā)生顯色反應，在540nm處有特征吸收峰，反應液顏色的深淺與酶解產生的還原糖量成正比，通過測定反應液在540nm吸光值增加速率，可計算S-NEX活性。

注意：實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。

需自備的儀器和用品：

可見分光光度計/酶標儀、微量玻璃比色皿/96孔板、天平、低溫離心機、水浴鍋、研缽、30~50目篩、蒸餾水。

操作步驟：具體的操作步驟請見“產品資料"文件

一、樣本處理（可適當調整待測樣本量，具體比例可以參考文獻）

新鮮土樣自然風干或37℃烘箱風干，過30~50目篩。

二、測定步驟

1、 可見分光光度計/酶標儀預熱30min以上，調節(jié)波長至540nm，分光光度計用蒸餾水調零。

2、 標準品的稀釋：臨用前將標準品用蒸餾水稀釋為2、1.5、1.2、1、0.8、0.4、0.2μmol/mL的標準溶液待測。

3、 標準品稀釋表：

備注：實驗中每管需要150μL。

4、 樣本測定（在EP管中加入下列試劑）

注意事項：

1. 若樣本ΔA<0.01，可適當增大樣本量或者延長50℃反應時間后測定；若樣本ΔA>1.5或者A測定＞1.5時，可用蒸餾水稀釋上清液后測定，注意同步修改計算公式中的稀釋倍數(shù)。

2. 建議使用螺旋管，防止沸水浴過程中蓋子爆開，改變反應體系。

實驗實例：

1、 取0.05g野蘑菇土，按操作表進行第一步反應2h后，取上清液用蒸餾水稀釋2倍后按照測定步驟操作，用96孔板測得ΔA測定=A測定- A對照=0.891-0.200=0.691，帶入標曲y=0.7418x-0.2302（R²=0.9992），計算x=1.242，按樣本質量計算S-NEX活性得：

S-NEX活性（U/g 土樣）= 0.15× x÷W×F =7.452 U/g 土樣。

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