北京索萊寶科技有限公司
專注于生物學(xué)試劑及試劑盒領(lǐng)域
服務(wù)熱線：18101056239
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產(chǎn)品型號(hào)：BC5310-50T/48S
更新時(shí)間：2024-04-19
廠商性質(zhì)：生產(chǎn)廠家
訪 問 量 ：1914
010-50973130
產(chǎn)品分類
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細(xì)胞鐵含量檢測試劑盒說明書
可見分光光度法
貨號(hào)：BC5310
規(guī)格：50T/48S
產(chǎn)品組成：使用前請(qǐng)認(rèn)真核對(duì)試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致，有疑問請(qǐng)及時(shí)聯(lián)系索萊寶工作人員。
試劑名稱 | 規(guī)格 | 保存條件 |
提取液 | 液體30 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
試劑一 | 液體15 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
試劑二 | 液體35 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
試劑三 | 液體6 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
標(biāo)準(zhǔn)液 | 液體1 mL×1支 | 2-8℃保存 |
溶液的配制：
1. 標(biāo)準(zhǔn)液：1 μmol/mL Fe3+標(biāo)準(zhǔn)液，臨用前取200μL 1 μmol/mL Fe3+標(biāo)準(zhǔn)液，加入200μL蒸餾水，充分混勻，配制成0.5μmol/mL標(biāo)準(zhǔn)液使用，現(xiàn)用現(xiàn)配。（實(shí)驗(yàn)中每管需要100μL，為減小實(shí)驗(yàn)誤差，故配制大體積。）
產(chǎn)品說明：
鐵元素是人體必須的微量元素之一，它是血紅蛋白、肌紅蛋白、細(xì)胞色素及其他酶系統(tǒng)的主要成分，幫助氧的運(yùn)輸，促進(jìn)脂肪氧化。缺乏鐵元素容易造成貧血、代謝紛亂，并影響機(jī)體的免疫功能。
鹽酸羥胺將細(xì)胞中的Fe3+還原成Fe2+，Fe2+在弱酸條件下與鄰菲羅啉形成橙紅色配合物，在510nm處有吸收峰，測定該波長吸光度即可計(jì)算鐵含量。
注意：實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測。
需自備的儀器和用品：
可見分光光度計(jì)、低溫離心機(jī)、可調(diào)式移液器、超聲破碎儀、1mL玻璃比色皿、蒸餾水。
操作步驟：
一、樣本處理（可適當(dāng)調(diào)整待測樣本量，具體比例可以參考文獻(xiàn)）
按照細(xì)胞數(shù)量（104個(gè)）：提取液體積（mL）為1000~2000︰1的比例（建議500萬細(xì)胞加入0.5mL提取液），冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率200W，超聲3秒，間隔7秒，重復(fù)30次），于4℃，8000g離心10min，取上清待測。
若樣本為真菌、細(xì)菌等有細(xì)胞壁的微生物可以適當(dāng)延長超聲時(shí)間。
二、測定步驟
1. 可見分光光度計(jì)預(yù)熱30min，波長調(diào)至510nm，蒸餾水調(diào)零。
2. 在1.5mL EP管按下表步驟加樣：
測定管 | 空白管 | 標(biāo)準(zhǔn)管 | |
樣本 | 100 | - | - |
蒸餾水 | - | 100 | - |
標(biāo)準(zhǔn)溶液 | - | - | 100 |
試劑一 | 200 | 200 | 200 |
試劑二 | 600 | 600 | 600 |
試劑三 | 100 | 100 | 100 |
充分混勻，25℃靜置顯色10min，于1mL玻璃比色皿中測定510nm處吸光值，分別記為A測定、A空白和A標(biāo)準(zhǔn)，計(jì)算ΔA測定=A測定-A空白，ΔA標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)-A空白。空白管和標(biāo)準(zhǔn)管只需做1-2次。 | |||
三、細(xì)胞鐵含量計(jì)算
1. 按細(xì)胞數(shù)目計(jì)算：
細(xì)胞鐵含量（ng/104 cell）=（C標(biāo)準(zhǔn)液×ΔA測定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)）×V提取×103×55.845÷500
=27.922×ΔA測定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)
2. 按蛋白濃度計(jì)算：
細(xì)胞鐵含量（ng/mg prot） =（C標(biāo)準(zhǔn)液×ΔA測定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)）×V提取×103×55.845÷（Cpr×V提?。?/span>
= 27922.5×ΔA測定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷Cpr
C標(biāo)準(zhǔn)液：0.5μmol/mL Fe3+標(biāo)準(zhǔn)液；V提取：加入提取液體積，0.5mL；103：單位換算系數(shù)，1μmol=103nmol；55.845：Fe的相對(duì)原子質(zhì)量，55.845ng/nmol；500：細(xì)胞數(shù)目，500萬；Cpr：蛋白質(zhì)濃度，mg/mL。
注意事項(xiàng)：
1、 如果ΔA測定＜0.01，可適當(dāng)加大樣本量后重新測定；如果測定管吸光值大于1，建議將樣本用蒸餾水適當(dāng)稀釋后進(jìn)行測定。注意同步修改計(jì)算公式。
2、 如果按蛋白濃度計(jì)算細(xì)胞鐵含量，需自行測定樣本上清蛋白濃度。
實(shí)驗(yàn)實(shí)例：
1、 取500萬HePG2細(xì)胞加入0.5mL提取液進(jìn)行超聲破碎提取，離心取上清后按照測定步驟操作，用1mL玻璃比色皿測得計(jì)算ΔA測定=A測定-A空白=0.171-0.000=0.171，ΔA標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)-A空白=0.573-0.000=0.573，按細(xì)胞數(shù)目計(jì)算含量得：
細(xì)胞鐵含量（ng/104 cell）=27.922×ΔA測定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)=8.333 ng/104 cell
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