磷脂酶D(PLD)檢測試劑盒脂肪酸代謝

產(chǎn)品簡介：

磷脂酶D(PLD)檢測試劑盒脂肪酸代謝
有效期
6個月
儲存條件
-20℃
單位
盒
英文名稱
Phospholipase D（PLD）Activity Assay Kit
檢測方法
可見分光光度法 Spectrophotometer
規(guī)格
50T/48S
自備試劑
該試劑盒實(shí)驗(yàn)過程中需自備試劑，詳情見網(wǎng)站說明書

產(chǎn)品型號：BC2410-50T/48S

更新時間：2024-07-08

廠商性質(zhì)：生產(chǎn)廠家

訪問量：1566

服務(wù)熱線

010-50973130

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產(chǎn)品分類

PRODUCT CLASSIFICATION

生化檢測試劑盒-常量法

谷胱甘肽過氧化物酶4（GPX4）活性檢測總谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px/GPX）活性檢測 α-L-巖藻糖苷酶（AFU）活性檢測硫代葡萄糖苷含量檢測生物堿含量檢測總氧化狀態(tài)（TOS）檢測 α-基丁酸脫氫酶（α－HBDH）活性檢測 3-磷酸甘油酯酶（GPP）活性檢測水溶性物質(zhì)羥自由基清除能力檢測植物銨態(tài)氮含量檢測試劑盒血清（漿）二胺氧化酶（DAO）活性檢測試劑盒細(xì)胞酸性磷酸酶細(xì)胞堿性磷酸酶果膠系列轉(zhuǎn)氫酶系列光合作用系列維生素系列糖原系列糖異生系列蛋白含量測定系列其它系列信號系列土壤系列離子系列 P450系列糖代謝系列蔗糖系列淀粉系列脂肪酸代謝系列蛋白酶系列糖酵解系列三羧酸循環(huán)系列線粒體呼吸鏈系列酯酶系列氨基酸代謝系列氮代謝系列 ATP系列抗逆系列抗氧系列氧化系列維生素C代謝系列谷胱甘肽系列輔酶Ⅱ系列輔酶Ⅰ系列

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產(chǎn)品介紹

磷脂酶D（PLD）活性檢測試劑盒說明書

可見分光光度法

注意：本產(chǎn)品試劑有所變動，請注意并嚴(yán)格按照該說明書操作。

貨號：BC2410

規(guī)格：50T/48S

產(chǎn)品組成：使用前請認(rèn)真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致，有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。

試劑名稱	規(guī)格	保存條件
提取液一	液體60 mL×1瓶	2-8℃保存
提取液二	液體0.6mL×1支	-20℃保存
試劑一	液體70 mL×1瓶	2-8℃保存
試劑二	液體10mL×1瓶	2-8℃保存
試劑三	粉劑×2瓶	2-8℃保存
試劑四	液體45 mL×1瓶	2-8℃保存
標(biāo)準(zhǔn)品	液體1 mL×1支	2-8℃保存

溶液的配制：

1．提取液二：試劑易揮發(fā)，用完后快速擰蓋，封口膜纏口；

2．試劑三：試劑放于試劑瓶內(nèi)玻璃管中。臨用前取一支加入3mL乙醇充分溶解后取上清使用；2-8℃可以分裝保存2周，避免反復(fù)凍融；

3．標(biāo)準(zhǔn)品：50umol/mL 膽*溶液，臨用前用試劑一稀釋100倍即500nmol/mL標(biāo)準(zhǔn)溶液備用（可以取10μL 50umol/mL 膽*溶液加入990μL試劑一混勻即500nmol/mL標(biāo)準(zhǔn)溶液）。

產(chǎn)品說明：

磷脂酶D（Phospholipases D，PLD）催化水解磷脂酰膽*末端的磷脂酰二酯鍵生成磷脂酸和膽*，膽*在膽*氧化酶催化作用下生成甜菜堿和過氧化氫，過氧化氫在過氧化氫酶的作用下將4-氨基安*比林和重蒸酚氧化成粉紅色物質(zhì)，在500nm處有特征吸收峰。

注意：實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測。

需自備的儀器和用品：

可見分光光度計(jì)、水浴鍋、超速冷凍離心機(jī)、可調(diào)式移液槍、天平、1mL玻璃比色皿、研缽/勻漿器/細(xì)胞超聲破碎儀、蒸餾水、無水乙醇和冰。

操作步驟：一、樣本處理（可適當(dāng)調(diào)整待測樣本量，具體比例可以參考文獻(xiàn)）

1、組織：按照質(zhì)量（g）：提取液一體積(mL)為1：5~10的比例加入提取液，建議稱取約0.1g樣本，加入0.99mL提取液一和0.01mL提取液二，冰浴勻漿后于4℃，10 000g離心5min；取全部上清于4℃、100 000g離心30min，棄上清，取沉淀溶于1mL試劑一。

2、細(xì)胞：按照細(xì)胞數(shù)量（10⁴個）：提取液體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細(xì)胞加入0.99mL提取液一和0.01mL提取液二），冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時間3min）；然后于4℃，10 000g離心5min；取全部上清于4℃、100 000g離心30min，棄上清，取沉淀溶于1mL試劑一。

3、血清（漿）：直接測定。

二、測定步驟

1、可見分光光度計(jì)預(yù)熱30min 以上，調(diào)節(jié)波長到500nm，蒸餾水調(diào)零。

2、樣本測定：

試劑名稱 (μL)	空白管	標(biāo)準(zhǔn)管	測定管
試劑一	100	-	-
試劑二	150	150	150
標(biāo)準(zhǔn)品	-	100	-
樣品	-	-	100
試劑三	100	100	100
充分混勻，30℃反應(yīng)30min，沸水浴10min，打開蓋子，自然冷卻5min。
試劑四	700	700	700
30℃反應(yīng)30min，測定500nm處吸光值，分別記為A空白管、A標(biāo)準(zhǔn)管和A測定管。計(jì)算ΔA標(biāo)準(zhǔn)= A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管，ΔA測定=A測定管-A空白管?？瞻坠芎蜆?biāo)準(zhǔn)管只需做1-2次。

三、酶活計(jì)算

1、按蛋白濃度計(jì)算

酶活定義：每毫克蛋白每分鐘水解磷脂酰膽*產(chǎn)生1nmol膽*所需的酶量一個酶活力單位。

PLD活性 (U/mg prot) =ΔA測定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)×C標(biāo)準(zhǔn)×V提取÷(Cpr×V提取)÷T = 16.7×ΔA測定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷Cpr

2、按樣本質(zhì)量計(jì)算

酶活定義：每克組織每分鐘水解磷脂酰膽*產(chǎn)生1nmol膽*所需的酶量一個酶活力單位

PLD活性 (U/g 質(zhì)量) = ΔA測定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)×C標(biāo)準(zhǔn)×V提取÷W÷T = 16.7×ΔA測定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷W

3、按細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量計(jì)算

酶活定義：每10⁴個細(xì)胞每分鐘水解磷脂酰膽*產(chǎn)生1nmol膽*所需的酶量一個酶活力單位。

PLD活性(U/10⁴cell）= ΔA測定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)×C標(biāo)準(zhǔn)×V提取÷細(xì)胞數(shù)量÷T = 16.7×ΔA測定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷細(xì)胞數(shù)量

4、按血清（漿）計(jì)算：

酶活定義：每毫升血清每分鐘水解磷脂酰膽*產(chǎn)生1nmol膽*所需的酶量一個酶活力單位。

PLD活性（U/mL）= ΔA測定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)×C標(biāo)準(zhǔn)×V血清（漿）÷V血清（漿）÷T = 16.7×ΔA測定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)

C標(biāo)準(zhǔn)：標(biāo)準(zhǔn)液濃度，500nmol/mL；V提?。杭尤氲奶崛∫后w積（提取液一+提取液二），1mL；V血清(漿)：血清(漿)體積，0.1mL；W：樣本質(zhì)量，g；細(xì)胞數(shù)量：以萬計(jì)；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL；T：反應(yīng)時間，30min。